Biotin Quantitative Determination ELISA Kit

Q3:稀释方案

稀释100倍：一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内，做100倍稀释； 稀释1000倍：两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍； 稀释100000倍：三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍； 每步稀释时取液量不少于3μl，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。

Q4:试剂盒中铝箔袋、覆膜的用途是什么？

除了已真空封存酶标板的铝箔袋外，试剂盒内会附赠一个空的铝箔袋，客户可以将拆卸的酶标板条密封保存于新铝箔袋内并按照说明书要求存放组分。 覆膜是在孵育阶段用于密封板孔的粘性膜，能控制和减少孵育阶段水分的蒸发并更好地维持整板均匀受热，最大程度降低边缘效应对检测结果的影响。

Q5:组织/细胞样本处理中提到的“反复冻融”过程该如何操作？

组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可。 细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。 样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF(Cat.E-EL-SR002)。

Q6:ELISA试剂盒有哪些规格？

有96T/48T/24T/96T*5的四种规格。其中24T为试用装规格。

Q7:如何进行超声操作？

使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞（参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14μm超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400A，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。再于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。超声过程中注意控制温度。

Q8:试剂盒为什么建议做预实验？如何进行预实验？

预实验的目的是： 1．确定该试剂盒是否适合您的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费； 2．帮助您熟悉试剂盒的操作流程，尤其是初次使用ELISA试剂盒/更换实验品牌的客户； 3．确定样本稀释与否及稀释倍数是否适合本试剂盒的测定并确认最适样本稀释信息； 4．帮助了解实验过程中可能出现的实验现象或者是问题，好及时作出调整； 具体方法：在正式检测前，选择差异较大的2-3个样本，进行不同浓度的样本稀释，然后按照说明书上的实验操作步骤进行预实验，根据预实验的结果，再结合试剂盒的检测范围来确定样本的最佳稀释倍数。

Q9:说明书中的标曲可以直接用来样本计算吗？

说明书上的标曲是指示标曲，主要是用于呈现拟合后标曲的形态以及最高/最低OD值的质控范围，不能直接使用。此外，受实验操作、实验环境以及仪器参数设定等因素的影响，实际操作获得的标曲OD值可能会跟说明书不完全一致（整体偏高或偏低），这种情况，建议通过在显色阶段控制前4个蓝色孔有明显颜色梯度，标曲最大OD值在1.2以上，以及标曲的相关系数在0.99以上，作为有效标曲。

Q10:测多个指标但是样本量不够怎么处理？

试剂盒的上样量是不能调整的，但是因为试剂盒灵敏度比较高，很多指标可以稀释检测。建议客户将待检指标和样本量的信息及时提供给技术支持，技术支持会进一步确认样本稀释信息并提供检测方案。