线粒体呼吸链复合物检测常见问题解答

1：E-BC-K149-M能否检测细胞样本？

这个试剂盒暂时不适用于细胞样本的检测，测定细胞样本的复合物I活性，推荐使用E-BC-K834-M。

2：检测时，必须是新鲜的样本吗，冻存的样本能否检测？

建议尽量使用新鲜样本检测，如果是冻存样本，可能会使结果偏低或测不出。冻存时间越长，对测值的影响越大，一般样本-80℃冻存不要超过一个月，如果冻存时间超过一个月了，不建议使用。

3：如果组织样本不足0.1g，能否进行实验，样本处理过程中加入的试剂量应该如何调整？

如果组织量不足0.1g，可按照说明书中的组织质量和匀浆液体积等比例减少，需要保证最终的样本匀浆后的体积足够线粒体复合物检测和蛋白浓度的检测。

4：组织样本必须检测蛋白浓度吗？

组织样本需要进行匀浆处理，匀浆程度不同，释放出的蛋白浓度也不同，因此通过检测样本中的蛋白含量，可以校正样本匀浆过程中差异，保证测值的准确性，因此组织样本需要检测蛋白浓度。

5：请问线粒体复合物系列的几个试剂盒（线粒体呼吸链复合物I、II、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ），组织样本的处理都是相同的吗，能不能一次处理样本检测多个指标呢？

这几个试剂盒的样本处理方法相同，可以使用任意一个试剂盒中的样本处理试剂对组织进行匀浆。但这几个试剂盒对于检测时间的要求比较严格，样本匀浆之后放置较长时间可能会使酶活降低，所以不建议一次处理多个样本检测，

6：E-BC-K149-M试剂盒说明书中建议一次检测不超过8个样本，这里指的是样本的数量还是样本孔的数量？例如我每个样本需要做2个复孔，那建议一次检测的数量是不超过8个还是4个呢？

由于此试剂盒的反应速率比较快，对于时间的控制要求十分精确，因此建议一次测定的样本孔数不超过8个，以保证测值结果的准确性。如果每个样本做2个复孔，那一次检测的样本数量最好不要超过4个。

7：E-BC-K149-M检测的值比较低，有部分值是负值，可能是什么原因？应该如何调整？

样本测值低或者是负值，可能有以下的几种原因：
① 样本不新鲜，冻存时间较久。样本冻存后会影响线粒体复合物的酶活，导致测值降低或是负值。可以换用新鲜样本进行检测。

② 样本匀浆之后，放置时间过长。组织样本破碎匀浆之后，匀浆液长时间放置也会使线粒体复合物的酶活降低，导致测值降低或是负值。样本匀浆之后马上检测，如果来不及检测，可分批处理样本。

③ 样本中线粒体复合物的酶活较高。样本中线粒体复合物的酶活高，反应速率快，在极短的时间内，反应就已经结束了，因而3 min内的OD值无显著变化。可以将样本进行稀释或增大稀释倍数，保证样本中的酶反应速率适合检测。

④ 样本中的中线粒体复合物的酶活太低。样本中线粒体复合物的酶活太低，OD值变化不明显，测值可能很低或者是负值。如果已经稀释样本，可以减小稀释倍数。如果样本本身就未稀释，可以延长反应时间，进行反应动力学实验，检测每分钟内的OD值变化情况。